Coliformes Fecais ou Termotolerantes
Os coliformes totais e fecais são os microrganismos mais abundantes como contaminantes ambientais e possuem várias técnicas de identificação e meios de cultura seletivos e diferenciais. A técnica mais utilizada para análise de água para a identificação de coliformes é a quantitativa dos tubos múltiplos.
Para a coleta da água é utilizado um frasco estéril com cerca de 100ml e transferidos 10 ml da amostra para uma série de três tubos com 10 ml de caldo lauril duplo ou caldo lactosado duplo (concentração dupla de nutrientes) com tubo de Duran invertido (tubo de vidro pequeno, colocado de boca para baixo dentro dos tubos com caldo para reter os gases formados durante o crescimento microbiano e indicar positividade no teste).
Após o término da primeira bateria de testes é realizada a segunda bateria, que consiste em transferir 1 ml da amostra de água para três tubos com 9ml de caldo lauril simples ou caldo lactosado simples, com tubo de Duran.
Por último é realizada a terceira bateria de testes, quando é transferido 0,1ml para três tubos com 9 ml de caldo lauril simples ou caldo lactosado simples, com tubo de Duran invertido. Incubar as três séries de tubos em estufa a 35oC por 48 horas. Resultados: (Positivos) Tubos turvos, com formação de bolhas de gás nos tubos de duran invertidos, indicando a presença de possíveis organismos coliformes e (Negativos) não há a formação de gás nos tubos de Duran.
Após a confirmação de coliformes (testes positivos) é necessário identificar se é um coliforme total (microrganismos presentes nas fezes em pequenas quantidades) ou coliformes fecais (microrganismos presentes nas fezes em grandes quantidades, como a E. coli).
A amostra com tubos positivos deve ser transferida com uma alça de inoculação, um tubo com 10 ml de caldo verde brilhante com tubo de Duran invertido e incubada por 24 horas a 35oC. Resultados: (Positivo): Presença de gás no tubo de Duran é indicativo de Coliformes Totais e (Negativo): ausência de gás nos tubos de Duran.
No próximo passo, os tubos positivos de caldo verde brilhante são transferidos para um tubo com 9 ml de Caldo EC com tubo de Duran invertido por meio de uma alça de inoculação e incubado em estufa a 44oC por 24 horas. Resultados: (Positivo): Presença de gás no tubo EC é indicativo de coliformes fecais (E. coli) e termotolerantes e (Negativos): Ausência de gás.
Os tubos positivos de caldo EC são inoculados em um meio de cultura seletivo para a identificação das colônias de coliformes e identificação de cepas. Geralmente os meios mais utilizados são o Ágar MacConkey e Ágar Eosina Azul de Metileno (EMB).
No Ágar MacConkey as colônias de E. coli são de coloração rosa a vermelho e no meio EMB as colônias são de coloração escura a verde brilhante.
